ABSTRACT
Objetivos: Estudiar el efecto de la infección con rabia sobre la ultraestructura dendrítica de las neuronas piramidales de la corteza cerebral en ratones inoculados con el virus por vía intramuscular. Métodos: Ratones adultos inoculados con el virus de la rabia y ratones inoculados con solución vehículo sin el virus (controles) fueron fijados por perfusión intracardiaca, con una solución que contenía paraformaldehído al 4% y glutaraldehído al 2%, cuando los animales infectados manifestaron signos avanzados de la enfermedad. Los encéfalos fueron extraídos y cortados en plano coronal en un vibrátomo. Fragmentos pequeños y delgados de estos cortes, que contenían el área de la corteza cerebral motora, fueron procesados para microscopía electrónica de transmisión. Resultados: En las dendritas distales de las neuronas piramidales de los animales controles se observaron mitocondrias largas y estrechas, así como abundantes microtúbulos organizados en paralelo con la membrana celular. En las dendritas distales de las neuronas piramidales de los ratones infectados con el virus se observaron unas estructuras electrodensas de forma irregular semejantes a figuras de mielina, pero no se observaron las mitocondrias alargadas y los microtúbulos fueron escasos. Algunas dendritas también exhibieron la formación de vacuolas que interrumpían la continuidad del citoplasma y los microtúbulos. Conclusión: La infección con virus de la rabia generó cambios ultraestructurales en las dendritas de las neuronas piramidales corticales que aparentemente no se conocían. Estos resultados son coherentes con hallazgos previos, usando otras técnicas y modelos experimentales, en donde se ha demostrado patología dendrítica inducida por la infección con rabia.
Objectives: To study the effect of rabies infection on the dendritic ultrastructure of pyramidal neurons in the cerebral cortex of mice intramuscularly inoculated with rabies virus. Methods: Adult mice inoculated with rabies virus and mice inoculated with vehicle solution without the virus (controls) were fixed by intracardiac perfusion with a solution containing 4% paraformaldehyde and 2% glutaraldehyde. When infected animals showed advanced signs of disease, their brains were extracted and cut into the coronal plane on a vibratome. Small and thin fragments of these cuts containing motor cortex area were processed for transmission electron microscopy. Results: Distal dendrites of pyramidal neurons of control animals showed long and narrow mitochondria and abundant microtubules arranged in parallel with the cell membrane. In distal dendrites of pyramidal neurons of rabiesinfected mice some irregular shape electrondense structures similar to myelin figures were observed but elongated mitochondria were not observed, and microtubules were scarce. Some dendrites also exhibited vacuole formation interrupting the continuity of cytoplasm and microtubules. Conclusion: Infection with rabies virus produced ultrastructural changes within dendrites of the cortical pyramidal neurons that apparently were not known. These results are consistent with previous findings using other techniques and experimental models where it has been shown dendritic pathology induced by infection with rabies.
ABSTRACT
Antecedentes: La rabia humana y animal es frecuente en Colombia. Su diagnóstico requiere inmnofluorescencia directa (IFD) e inoculación intracerebral al ratón (IIC), condiciones que alcanzan pocos laboratorios. La histopatología muestra cuerpos de Negri entre el 40 por ciento al 87 por ciento de los casos. Nuestro objetivo es desarrollar y determinar la utilidad del método avidina-biotina-peroxidasa (ABP) en tejido fijado en formol e incluido en parafina. Materiales y métodos: Se estandarizó la técnica ABP usando muestras de encéfalo con rabia confirmada por IFD, IIC al ratón o histopatología. La técnica se pudo a prueba estudiando cortes de 100 encéfalos humanos o de animales sospechosos de tener rabia. Se escogieron encéfalos incluídos en parafina o mantenidos en congelación durante años, SNC fresco de ratón inoculado con virus fijo y cerebros normales o con otras encefalitis virales. Se determinó la sensibilidad, la especificidad y la reproducibilidad del método. Resultados: La técnica de ABP muestra sensibilidad mayor o igual a .80 y especificidad mayor o igual a .97. La concordancia con respecto a la IIC y a la IFD dio resultados entre substanciales y casi perfectos, según la escala de Landys y Koch, niveles altos que también se obtienen al evaluar la reproducibilidad intraobservador e interobservador. La técnica fue siempre mejor que la HE. Conclusiones: La técnica es útil, confiable, reproducible, fácil de realizar y funciona bien inclusive en encéfalos con pobre preservación tisular. Merece incluirse entre los procedimientos de rutina o alternativos en el dignóstico de la rabia humana y animal